고성능 액체 크로마토그래피에는 주로 주입 시스템, 주입 시스템, 분리 시스템, 검출 시스템 및 데이터 처리 시스템이 포함됩니다. 각각의 구성과 특징을 소개하겠습니다.
1. 주입 시스템은 일반적으로 다이어프램 주입기 또는 고압 주입 챔버를 사용하여 일정한 주입량으로 주입 작업을 완료합니다. 이는 샘플 분석의 재현성을 향상시키는 데 도움이 됩니다.
2. 주입 시스템은 고압 펌프, 이동상 저장소 및 경사도 측정기의 세 부분으로 구성됩니다. 고압 펌프의 일반적인 압력은 l입니다. 47-4.4X107Pa, 조정 가능하고 안정적인 유량. 고압 이동상이 크로마토그래피 컬럼을 통과하면 컬럼 내부 시료의 확산 효과를 감소시키고 컬럼 내부 이동 속도를 가속화하며 분리도를 향상시키고 시료를 회수할 수 있습니다. 시료의 생물학적 활성을 유지하는 데 유용합니다. 이동상 저장 오류 및 기울기 분석기는 용리액의 극성, 이온 강도 및 pH 값 변경, 경쟁 억제제 또는 변성제 사용을 포함하여 고정상 및 샘플의 특성에 따라 이동상을 변경할 수 있습니다. 이를 통해 차이점이나 이성질체 세트가 하나만 있는 경우에도 여러 물질을 효과적으로 분리할 수 있습니다.
3. 분리 시스템에는 크로마토그래피 컬럼, 연결 튜브, 온도 조절 장치 등이 포함됩니다. 크로마토그래피 컬럼의 길이는 일반적으로 10-50cm(두 개가 필요한 경우 연결 튜브를 그 사이에 추가할 수 있음)이며 내경은 2-5mm, 고품질 스테인리스 스틸, 두꺼운 유리관 또는 티타늄 합금으로 제작되었습니다. 입자 크기가 5-10μm인 고정상(매트릭스와 고정액으로 구성)이 있습니다. 고정상의 매트릭스는 기계적 강도가 높은 수지 또는 실리카겔로 만들어지며 불활성(예: 알칼리성 실리카겔이 제거됨), 다공성(공극 크기 최대 1000Ω) 및 큰 비표면적을 갖습니다. 이들은 결합을 위해 기계적으로 코팅되거나(가스 크로마토그래피 고정상의 제조와 유사) 다양한 유전자(예: 인산염, 4차 아미노, 히드록시메틸, 페닐, 아미노 또는 다양한 길이의 탄소 사슬 알킬) 또는 리간드 유기 화합물과 화학적으로 결합됩니다. . 따라서 이 고정된 상대 구조는 선택성이 좋습니다. 예를 들어, 다공성 실리카겔 표면에 완두콩 응집소(PSA)를 결합시킨 후 섬유아세포의 당단백질을 분리할 수 있습니다. 또한, 고정상 기반 플라스미드의 크기가 작고 컬럼 베드가 균일하고 조밀한 상태를 얻기 쉽습니다. 와전류 확산 효과를 쉽게 줄일 수 있습니다. 매트릭스 입자 크기가 작고 미세 기공이 얕으며 미세 기공 영역에서 시료의 물질 전달이 짧습니다. 이는 대역폭을 줄이고 해상도를 향상시키는 데 유용합니다. 기둥 효과 이론 분석에 따르면, 매트릭스 입자 크기가 작을수록 플레이트의 이론적인 수 N은 커집니다. 이는 매트릭스 입자 크기가 작을수록 분리 정도가 높다는 것을 추가로 입증합니다. 또한, 고성능 액체 크로마토그래피 온도 조절 장치는 온도를 상온에서 60도까지 조절할 수 있어 물질 이동 속도를 높여 분석 시간을 단축하고, 크로마토그래피 컬럼의 효율성을 향상시킬 수 있다.
4. HPLC 검출 시스템에 일반적으로 사용되는 검출기에는 자외선 검출기, 굴절률 검출기 및 형광 검출기가 포함됩니다.
(1) UV 검출기는 자외선(또는 가시광선) 아래에서 흡수 특성을 갖는 시료를 검출하는 데 적합합니다. 특징: 광범위한 응용 범위(단백질, 핵산, 아미노산, 뉴클레오티드, 펩타이드, 호르몬 등); 높은 감도(검출 한계: 10-10g/ml); 넓은 선형 범위; 온도 및 유속 변화에 민감하지 않습니다. 기울기 용액으로 용출된 샘플을 검출할 수 있습니다.
(2) 시차 굴절률 검출기는 이동상 검출기에 의해 검출된 굴절률과 굴절률이 다른 모든 시료 성분을 검출하는 데 사용할 수 있습니다. 현재 대부분의 탄수화물 화합물은 이 검출 시스템을 사용하여 검출됩니다. 보편성이 강하고 조작이 간단한 시스템이지만 감도가 낮고(검출 한계 10-7g/ml) 이동상의 변화로 인해 굴절률이 변화할 수 있습니다. 따라서 미량 분석이나 기울기 용출 샘플 검출에는 적합하지 않습니다.
(3) 형광 검출기는 방출된 빛의 형광 강도와 농도를 기반으로 특정 조건에서 형광 유기 화합물(예: 다환 방향족 탄화수소, 아미노산, 아민, 비타민 및 특정 단백질)을 측정하는 데만 적합합니다. 감도가 매우 높으며(검출 한계는 10-12~10-14g/ml) Gradient Elution 작업에서 미량 분석 및 검출에 사용할 수 있습니다.
5. 데이터 처리 시스템은 테스트 데이터를 수집, 저장, 표시, 인쇄 및 처리하여 샘플을 분리하고 준비 또는 식별 작업을 올바르게 수행할 수 있습니다.